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馬斯亮藍(lán)G250這么操作更準(zhǔn)確

點(diǎn)擊次數(shù):2058     更新時(shí)間:2022-07-12

馬斯亮藍(lán)G250這么操作更準(zhǔn)確


考馬斯亮藍(lán)G250屬于三苯甲烷類染料,有G250和R250兩種,可與蛋白質(zhì)形成較強(qiáng)的非共價(jià)復(fù)合體,白-染料復(fù)合物的形成穩(wěn)定染料攜帶的負(fù)電荷陰離子(如磺酸基),從而產(chǎn)生在膜上或者膠上肉眼可見的藍(lán)色。考馬斯亮藍(lán)G250是Bradford法蛋白質(zhì)定量試劑的主要成分,考馬斯亮藍(lán)R250多用于聚丙烯酰胺凝膠電泳后蛋白質(zhì)條帶的染色。

性狀:藍(lán)色至深紫色粉末

CAS: 6104-58-1

分子式:C47H48N3O7S2Na;分子量:854kD

溶解性:溶于熱水(50mg/ml),乙醇(40mg/ml)

純度:≥90%

 

Bradford法測蛋白濃度試驗(yàn)過程

1) 染液的配制:

將100mg的G-250溶解于50mL 95%的乙醇中,加入85%(w/V)的磷酸l00mL,加水定容至1L。

2) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:

在7個(gè)試管中分別加入含0、10、20、30、40、50、60ug標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液,用水補(bǔ)足到60ul,加3mL染色液,混勻后室溫放置15分鐘,至595nm處比色測定。以蛋白質(zhì)含量為橫坐標(biāo),A595的值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3) 測定:

取未知濃度的樣品60ul,同上測定,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的含量。

該方法反應(yīng)快、操作簡便、消耗樣品少,但不同蛋白質(zhì)間的差異大,標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性不好,顯色受時(shí)間和溫度影響??捡R斯亮藍(lán)染色能力強(qiáng),特別要注意比色杯的清洗。較高濃度的去污劑(Triton X-100,SDS等)、尿素和硫酸銨對測定有干擾。

染色方法:

1)考馬斯亮藍(lán)G250染色液的配制

將0.2g G250溶于100ml水中(需要加熱至50°C促進(jìn)溶解)。冷卻后,加入100ml 2N H2S04。室溫放置3h-過夜,然后濾紙除雜。過濾后的溶液,小心加入22.2ml 10N KOH,然后加入28.7g TCA?;靹蚝笫覝胤胖?gt; 3h,再過濾除雜從而獲得琥珀般的棕色溶液,不含藍(lán)色沉淀。

2)染色只需將膠*浸在此染色液中,約15 min后條帶就會(huì)顯示出來。幾小時(shí)后染色條帶的亮度和靈敏度會(huì)進(jìn)一步加強(qiáng)。

3)染色液室溫約穩(wěn)定存放2-3周。

保存:室溫保存

備注:本公司所有產(chǎn)品僅限科研使用


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