信帆生物銷(xiāo)售部植物α-淀粉酶！

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測(cè)定意義：

淀粉酶負(fù)責(zé)水解淀粉，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可隨機(jī)地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵，生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖，同時(shí)使淀粉的粘度降低，因此又稱(chēng)為液化酶。

測(cè)定原理：

還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì)。β-淀粉酶不耐熱，在70℃鈍化15min，從而測(cè)定α-淀粉酶活性。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：25mL×1瓶，常溫保存，若有黃色晶體析出，需加熱溶解后再用；

試劑二：20mL×1瓶，4℃保存。

粗酶液提取：

稱(chēng)取約0.1g樣本，加0.8mL蒸餾水勻漿；勻漿后在室溫下放置提取15min，每隔5min振蕩1次，使其充分提??；3000g，常溫離心10min，吸取上清液并且加蒸餾水定容至10 mL，搖勻，即為淀粉酶原液。

操作步驟和加樣表（在1.5mLEP管中依次加入下列試劑）：

1、β-淀粉酶滅活：

70℃水浴15min左右，冷卻

2、加入試劑一并且保溫：

將以上對(duì)照管、測(cè)定管和試劑二置于40℃恒溫水浴中保溫10min左右

3、準(zhǔn)確反應(yīng)5min

在40℃恒溫水浴中準(zhǔn)確保溫5min

4、加入試劑一，并且混勻

混勻，室溫靜置10min，蒸餾水調(diào)零，540nm處讀取對(duì)照管和測(cè)定管吸光度，分別記為A1和A2。

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