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檸檬酸合成酶（CS）實(shí)驗(yàn)代測(cè)

又稱檸檬酸縮合酶，在三羧酸循環(huán)首步反應(yīng)中，催化乙酰輔酶A的乙基與草酰乙酸的酮基結(jié)合生成檸檬酰輔酶A，以便后續(xù)高能硫酸鍵水解，釋放出輔酶A，得到檸檬酸。檸檬酸合成酶是一個(gè)調(diào)控酶，此酶的底物乙酰輔酶A和草酰乙酸是它的激活劑，NADH、琥珀酰輔酶A是抑制劑。
即citrate synthetase，又稱檸檬酸縮合酶，在三羧酸循環(huán)首步反應(yīng)中，催化乙酰輔酶A的乙基與草酰乙酸的酮基結(jié)合生成檸檬酰輔酶A，以便后續(xù)高能硫酸鍵水解，釋放出輔酶A，得到檸檬酸。檸檬酸合成酶是一個(gè)調(diào)控酶，NADH、琥珀酰輔酶A是抑制劑。乙酰輔酶A和草酰乙酸作為檸檬酸合酶的底物，其含量隨細(xì)胞代謝狀態(tài)而改變，從而影響檸檬酸合成的速率，是它的別構(gòu)激活劑。
注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。 
測(cè)定意義：                            CS（EC 2.3.3.1）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中，是三羧酸循環(huán)限速酶，是三羧酸循環(huán)主要調(diào)控位點(diǎn)之一。 
測(cè)定原理： 
CS催化乙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生檸檬酰輔酶A，進(jìn)一步水解產(chǎn)生檸檬酸；該反應(yīng)促使無色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB，在 412nm處有特征吸光值。 
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器： 
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、無水乙醇和蒸餾水 。

檸檬酸合成酶（CS）實(shí)驗(yàn)代測(cè)