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抗壞血酸過(guò)氧化物酶（APX）實(shí)驗(yàn)代測(cè)

測(cè)定原理：抗壞血酸過(guò)氧化物酶（APX）催化抗壞血酸（ASA）與過(guò)氧化氫反應(yīng)，使ASA氧化成單脫氫抗壞血酸（MDASA）、隨著ASA被氧化，溶液中290nm波長(zhǎng)下的吸光度值（A290）減少值，計(jì)算抗壞血酸過(guò)氧化物酶（APX）活性。ASA氧化量按消光系數(shù)2.8（mol/ml）cm計(jì)算。
APX是抗壞血酸過(guò)氧化物酶的英文簡(jiǎn)稱。是植物活性氧代謝中重要的抗氧化酶之一，尤其是葉綠體中清除H2O2的關(guān)鍵酶，又是維生素C代謝的主要酶類。H2O2是植物葉綠體中光合電子傳遞鏈和某些酶反應(yīng)的天然產(chǎn)物，是具有毒害作用的活性氧。可催化植物葉中維生素C的氧化還原，由兩種同工酶組成：其一為單聚體，相對(duì)分子質(zhì)量34 000，含血紅素，不含糖蛋白。兩種同工酶的分子量對(duì)基質(zhì)的消耗、對(duì)電子供體的專一性和其他酶學(xué)性質(zhì)，均不相同。該酶在氧化、還原態(tài)時(shí)，出現(xiàn)不同波長(zhǎng)的索端氏峰；添加CN_或抗壞血酸耗盡時(shí)，索端氏峰改變。已將該酶純化，并測(cè)定了它們的氨基酸排列順序，在植物葉中催化抗壞血酸的氧化。
植物中的APX：
APX是一種亞鐵血紅素蛋白，植物的APX存在著多種同工酶，且位于細(xì)胞中不同區(qū)域。一種為位于葉綠體中并分解葉綠體中的H2O2的葉綠體型同工酶;另一種為位于葉綠體之外的其它細(xì)胞組分的細(xì)胞質(zhì)型同工酶。
這兩種同工酶具有共同的特點(diǎn)，但也有不同的方面:①胞質(zhì)型同工酶APX占總APX的40%以上；②葉綠體型APX對(duì)AsA的專一性比胞質(zhì)型APX更強(qiáng)；③在不含AsA的介質(zhì)中，葉綠體型同工酶比細(xì)胞質(zhì)型同工酶更快喪失活性；④葉綠體型同工酶對(duì)琉基試劑和經(jīng)基脈、對(duì)氨基苯酚等抑制劑較胞質(zhì)型同工酶更為敏感；⑤二者的分子量不同。

抗壞血酸過(guò)氧化物酶（APX）實(shí)驗(yàn)代測(cè)