糖化血紅蛋白（GHb）測(cè)試盒

（15 管/14 樣）

一、測(cè)定原理：

血紅蛋白中具有酮胺鍵的糖化血紅蛋白在酸性環(huán)境中加熱，使己糖部分脫水，生成 5-羥甲基糠醛 （5-HMF）化合物，后者可與 TBA 反應(yīng)呈黃色，然后進(jìn)行比色定量。

二、試劑組成（15 管/14 樣）：

試劑一：液體 20mL×1 瓶，室溫保存 6 個(gè)月。

試劑二：蛋白沉淀劑 20mL×1 瓶，室溫保存 6 個(gè)月。

試劑三：顯色劑 10mL×1 瓶，室溫避光保存 3 個(gè)月。

試劑四：氰化高鐵血紅蛋白測(cè)試液 40mL×1 瓶，避光保存 3 個(gè)月。

三、操作過程：

1、紅細(xì)胞洗滌：

取 EDTA 或肝素抗凝全血 2～4mL 置于帶刻度離心管中，以 500～1000 轉(zhuǎn)/分，離心 5～10 分鐘， 棄上清留沉淀的紅細(xì)胞，然后用生理鹽水按上述方法洗滌 2～3 次。（若來(lái)不及洗滌抗凝全血可放置 48小時(shí)）

2、溶血液的制備：

①、取壓積紅細(xì)胞 1mL 加冷雙蒸水 1.5mL，用手激烈震搖數(shù)分鐘，或旋渦混勻器充分混勻 1 分鐘制得溶血液，此溶血液-20℃保存，可放置 70 天。

②、溶血液的血紅蛋白（Hb）濃度測(cè)定方法如下：

取溶血液 10ml 加試劑四 2.5mL，混勻，室溫放置 10 分鐘，用分光光度計(jì)在 540nm 處，1cm 光徑水調(diào)零測(cè)各管吸光度；將所得吸光度×0.3677 即為 Hb 的含量 g/mL 。

3、酸化：

取玻璃試管，標(biāo)明“0"即空白管，“U"即測(cè)定管，在“0"管中加入雙蒸水 2mL，“U"管中加入溶血液 2mL，然后各管均加入試劑一 1mL 酸化。加試劑一要緩慢，邊滴邊搖邊加入。

4、水解：

將上述試管加橡皮塞或塑料薄膜，（用針戳一小孔再用橡皮筋扎緊，將玻璃管口封?。Ｖ梅兴≈谢蚋稍锵?/span> 100℃加熱水解 1 小時(shí)。

5、顯色：

①、各管加試劑二（蛋白沉淀劑）1mL，（遇天冷時(shí)，水解液可能會(huì)凝固，可再加溫使其溶解。）加試劑二要緩慢，邊滴邊搖邊加入。加完后在旋渦混勻器上混勻，再 3000～3500 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘。

②、取上清 2mL，各加試劑三（顯色劑）0.5mL，40℃水浴保溫 30 分鐘。

③、冷卻后，雙蒸水調(diào)零、443nm、1cm 光徑，測(cè)各管的吸光度。

五、參考值：

正常時(shí)每 10 克血紅蛋白中的糖化血紅蛋白的吸光度值范圍為 13.3～23.5。

六、附注：1、本法精密度較好，平均 CV 值為 4.2%。

2、溶血液如果未能及時(shí)測(cè)定，可貯存于-20℃的條件下達(dá) 70 天，不影響結(jié)果。

3、本法操作簡(jiǎn)便不需特殊儀器。

4、計(jì)算結(jié)果換算公式：

IFCC-HbAlc（%）=每 10 克血紅蛋白的吸光度×0.001+0.0154，

IFCC- HbAlc（mmol/mol）=13×IFCC-HbAlc（%）×100-7.4，

DCCT- HbAlc（%）=（IFCC- HbAlc（mmol/mol））÷10.929+2.15）÷100。

 糖化血紅蛋白（GHb）測(cè)試盒